Fl-esperimenti tal-kultura taċ-ċelluli, il-pipetti jintużaw ħafna drabi, u l-eżattezza tal-operazzjoni tagħhom taffettwa direttament l-affidabbiltà u r-ripetibbiltà tar-riżultati sperimentali. Dawn li ġejjin huma xi suġġerimenti għall-operazzjoni tal-pipetta fil-kultura taċ-ċelluli, li nispera li tkun ta 'għajnuna għall-esperiment tiegħek.
1. Agħżel il-pipetta u l-ponta t-tajba
- Għażla tal-pipetta: Agħżel il-pipetta tal-lemin skont il-volum ta 'likwidu li għandu jiġi trasferit. Il-firxa normali tal-volum operattiv tal-biċċa l-kbira tal-pipetti hija 10-100% tal-firxa indikata. Ipprova tevita li tistabbilixxi l-volum ta 'pipetta għal inqas minn 10% tal-volum massimu, u uża pipetta ta' firxa żgħira għal operazzjonijiet ta 'pipetting b'volum żgħir.
- Għażla tal-ponta: Agħżel ponta li taqbel mal-pipetta u żgura li l-ponta tkun imdaħħla sewwa biex tevita t-tnixxija tal-arja. Barra minn hekk, għal esperimenti speċifiċi (bħal operazzjoni asettika), għandhom jintgħażlu ponot awtoklavi.
2. Laħlaħ il-ponta
Laħlaħ il-ponta 2-3 biex tifforma film omoġenju fil-ponta, u b'hekk ittejjeb l-eżattezza tal-pipetting. Barra minn hekk, jista 'jinnewtralizza l-effett kapillari fil-mikropipetti, li jista' jagħmel it-temperatura ġewwa l-ponta konsistenti mat-temperatura tal-kampjun għal pipetting ta 'volum kbir. Għandu jkun innutat li t-tlaħliħ jista 'jkollu effett negattiv fuq ir-riżultati meta jqabbad soluzzjonijiet sħan u kesħin.
3. Ikkontrolla l-veloċità tal-aspirazzjoni u t-tqassim
- Tagħfas bla xkiel: Agħfas u rrilaxxa l-buttuna ta 'kontroll bla xkiel u kontinwament, aktar milli tagħfas u teħlesha f'daqqa. Dan jista 'jevita l-formazzjoni ta' bżieżaq u jtejjeb l-eżattezza tal-pipetting.
- Pawsa: Wara li taspira l-likwidu, ħalli l-ponta fil-likwidu għal madwar 1 sekonda, speċjalment għal dawk il-likwidi viskużi. Immedjatament tiġbed il-ponta tista 'tirriżulta f'aspirazzjoni ta' likwidu mhux kompluta.
4. Oqgħod attent għall-fond tal-immersjoni tal-ponta
- Micropipette: il-ponta għandha tkun mgħaddas 2-3 mm.
- Pipetta ta 'medda kbira: il-fond ta' immersjoni għandu jkun 5-6 mm. Jekk il-ponta tkun mgħaddsa wisq fil-fond, l-arja ġewwa l-ponta tkun ikkompressata, u tikkawża li wisq likwidu jiġi aspirat. Likwidu li jibqa 'fuq il-wiċċ tal-ponta jista' wkoll jaffettwa r-riżultati.
5. Operazzjoni vertikali
Għaddas il-pipetta fil-kampjun kemm jista 'jkun vertikalment, preferibbilment mingħajr ma tiddevja mill-pożizzjoni vertikali b'aktar minn 20 grad. Minbarra li ttejjeb l-eżattezza tal-volum tal-pipetta, dan jista 'wkoll jipprevjeni li l-likwidu jiċċirkola fil-pipetta minħabba inklinazzjoni eċċessiva.
6. Osserva l-ponta tal-pipetta
Meta tkun qed tħejji biex teħles il-likwidu, oqgħod attent jekk hemmx qtar żejjed imwaħħal mal-wiċċ tal-ponta tal-pipetta. Wara l-ħatt tal-likwidu, il-ponta tal-ponta tal-pipetta tista 'tintmess mal-ġenb tal-kontenitur biex tiżgura li l-iskarikar ikun biżżejjed bir-reqqa biex jipprevjeni li l-aħħar qatra ta' likwidu ma tibqax fuq il-ponta tal-ponta tal-pipetta.
7. Agħżel il-metodu tal-pipetting xieraq
- Metodu ta 'ġbid pożittiv: Adattat għal ħafna likwidi. Meta terda l-likwidu, agħfas il-buttuna sal-ewwel punt ta 'waqfien, imbagħad ħarġet bil-mod il-buttuna biex terġa' lura għall-punt tat-tluq. Imbagħad agħfas il-buttuna sal-ewwel punt ta 'waqfien biex tħassar il-likwidu, nieqaf għal ftit żmien u kompli agħfas il-buttuna għat-tieni punt ta' waqfien biex tisplodi l-likwidu li jifdal. Fl-aħħar irrilaxxa l-buttuna.
- Metodu ta 'ġbid b'lura: Adattat għal likwidi viskużi ħafna, likwidi bijoloġikament attivi, likwidi ta' ragħwa faċilment jew ammonti estremament żgħar ta 'likwidi. L-ewwel terda f'aktar likwidu mill-firxa stabbilita, u ma tisplodix il-likwidu li jifdal meta tittrasferixxi l-likwidu.
8. Żomm il-pipetta nadifa u miżmuma
- Kalibrazzjoni regolari: Wara li tuża l-pipetta għal perjodu ta 'żmien, jeħtieġ li tiġi kkalibrata biex tiżgura l-eżattezza tagħha.
- Tindif: Wara kull użu, il-pipetta għandha titnaddaf fil-ħin biex tevita likwidu residwu milli jikkontamina l-esperiment li jmiss.
9. Operazzjoni asettika
Fil-kultura taċ-ċelluli, l-operazzjoni asettika hija importanti ħafna. Meta tuża pipetta, oqgħod attent għall-punti li ġejjin:
- Disinfezzjoni: Qabel l-użu, imsaħ il-pipetta u l-ponta b'ballun tal-qoton tal-alkoħol għad-diżinfezzjoni.
- Evita kontaminazzjoni inkroċjata: Uża ponta ġdida għal kull kampjun biex tevita kontaminazzjoni inkroċjata.
Bil-pariri ta 'hawn fuq, tista' tuża pipettes għal esperimenti tal-kultura taċ-ċelluli b'mod aktar preċiż u effiċjenti, u ttejjeb l-affidabbiltà u r-ripetibbiltà tar-riżultati sperimentali. Nispera li dawn il-pariri jgħinuk!